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產(chǎn)品型號：
更新時間：2024-10-11
廠商性質(zhì)：代理商
訪問量：759
服務(wù)熱線01084640949
產(chǎn)品分類
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Human IL-23 ELISA Kit
用途：人IL-23 ELISA試劑盒用于體外定量檢測人血清，血漿，緩沖液或細胞培養(yǎng)液中的白介素23。此試劑盒只用于科研，不能用于診斷。
檢測原理：
IL-23試劑盒應(yīng)用的是夾心法固相酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）。IL-23特異單克隆抗體被包被于微孔板上，已知IL-23濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的樣品可在此反應(yīng)孔中進行檢測。先將IL-23抗原和生物素標(biāo)記IL-23特異單克隆抗體同時孵育。洗滌后加入親和素過氧化物酶，孵育后洗去未結(jié)合的酶。其后加入底物，產(chǎn)生顏色反應(yīng)，顏色的深淺與樣品中IL-23的濃度成一定的比例關(guān)系。
試劑盒組成及配制：
試劑（2-8℃保存） | 1x48孔的配置 產(chǎn)品編號：#850.960.048 |
配制 |
96T微孔板 | 1/2 | 即用型(已包被) |
塑料板蓋 | 2 | |
標(biāo)準(zhǔn)品：100pg/ml | 1瓶 | 按瓶上的說明稀釋（見試劑制備，） |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 | 1瓶（25ml） | 即用型 |
生物素標(biāo)記IL-23抗體 | 1瓶(0.4ml) | 用生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋（見試劑制備） |
生物素標(biāo)記抗體稀釋液 | 1瓶(7ml) | 即用型 |
親和素-HRP | 2瓶(5ul) | 0.5ml HRP稀釋液預(yù)稀釋（見試劑制備，） |
HRP稀釋液 | 1瓶(23ml) | 即用型 |
洗滌緩沖液 | 1瓶(10ml) | 200x，蒸餾水稀釋（見試劑制備） |
TMB | 1瓶(11ml) | 即用型 |
H2SO4終止液 | 1瓶(11ml) | 即用型 |
自備材料：
蒸餾水；加樣器：10ul, 50ul, 100ul, 200ul, 1000ul; 漩渦振蕩器和磁力攪拌器
保存條件：
試劑盒保存于2-8度，
洗滌緩沖液：制備好后，2-8度可保存1周以上
標(biāo)準(zhǔn)品：制備好后即用，不要保存。
生物素標(biāo)記二抗：制備好后即用，不要保存。
親和素-HRP: 制備好后即用，不要保存。
樣品收集，處理和保存：
1. 細胞培養(yǎng)上清：1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
2. 血清——操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000xg離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
3. EDTA，檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000Xg離心30分鐘去除顆粒。
4. 如果樣品不直接使用，將其分為小部分（250-500ul）-70℃下保存，避免反復(fù)凍融。
如果可能，不要使用溶血和高脂血。如果血清中有大量的顆粒，檢測前先離心或過濾。
注意：不要在37℃或56℃加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍
實驗方案：
用前所有試劑置于常溫
標(biāo)準(zhǔn)品濃度 pg/ml |
樣品 | |||||||||||
A | 5000 | 5000 | ||||||||||
B | 2500 | 2500 | ||||||||||
C | 1250 | 1250 | ||||||||||
D | 625 | 625 | ||||||||||
E | 312.5 | 312.5 | ||||||||||
F | 156.2 | 156.2 | ||||||||||
G | 空白 | 空白 | ||||||||||
H | ||||||||||||
試劑準(zhǔn)備：
1. 洗滌緩沖液（200x）的稀釋：蒸餾水200倍稀釋成1X的工作液。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的制備：用10X的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液儲液加入225ml蒸餾水。稀釋后的溶液可在2-8度保存一周。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品的制備：按標(biāo)準(zhǔn)品瓶上的說明，加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，稀釋后濃度為5000pg/ml。溫柔上下顛倒混勻。直接在檢測板上對校準(zhǔn)品做系列稀釋，濃度范圍：5000-156.25pg/ml。每次重新做實驗，都需要重新做標(biāo)準(zhǔn)曲線。吸取200ul重懸后的標(biāo)準(zhǔn)品到A1, A2孔（5000pg/ml），取100ul標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液到B1, B2, C1, C2, D1,D2, E1,E2, F1, F2孔。從A1, A2孔吸取100ul到B1, B2孔，用加樣器反復(fù)吸排使其混合。小心不要擦到孔的內(nèi)表面。同樣從B1, B2孔吸取100ul到C1,C2；再從C1,C2到D1,D2等，從最后的兩個孔（F1, F2）中吸去100ul不要。這樣從A1,A2到F1,F2，IL-23標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的濃度為5000pg/ml到156.25pg/ml。也可在試管中進行此稀釋，將稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品直接加入反應(yīng)孔中。
4. 生物素標(biāo)記IL-23抗體的制備：
生物素標(biāo)記抗IL-23的稀釋：每次實驗前準(zhǔn)備。根據(jù)實驗的孔數(shù)，以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋。稀釋量見下表。
反應(yīng)孔的數(shù)量 | 生物素標(biāo)記抗體（ul） | 生物素標(biāo)記抗體稀釋液（ul） |
16 | 40 | 1060 |
24 | 60 | 1590 |
32 | 80 | 2120 |
48 | 120 | 3180 |
96 | 240 | 6360 |
5. 親和素-HRP的稀釋：5ul 親和素-HRP加入0.5ml HRP稀釋液, 每次實驗前準(zhǔn)備，不要保存此稀釋后液體。根據(jù)反應(yīng)孔的數(shù)量進一步稀釋，見下表。
反應(yīng)孔的數(shù)量 | 親和素-HRP(ul) | 親和素-HRP稀釋液(ml) |
16 | 30 | 2 |
24 | 45 | 3 |
32 | 60 | 4 |
48 | 75 | 5 |
96 | 150 | 10 |
檢測程序
使用前，將所有試劑充分混合，不要使液體產(chǎn)生泡沫。根據(jù)樣品數(shù)量加上空白，標(biāo)準(zhǔn)品決定所需的板條，每個樣品，標(biāo)準(zhǔn)品，空白和質(zhì)控都應(yīng)做雙份。
詳細步驟 | |
1 | 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線 |
2 | 按實驗方案在對應(yīng)孔加入100ul標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，標(biāo)準(zhǔn)品，樣本及空白孔均做復(fù)孔。 |
3 | 用塑料膜封板，室溫（18-25.℃）孵育2小時加入50ul生物標(biāo)記的IL-23抗體到各孔 |
4 | 用封板膜，封板，室溫（18-25.℃）孵育2小時 |
5 | 去掉封板膜，按以下程序洗板： a. 吸出孔內(nèi)液體。 b. 每孔加入300ul1X的洗滌緩沖液 c. 吸出孔內(nèi)液體 重復(fù)步驟b和c兩次 |
6 | 加入100ul親和素-HRP溶液到各孔 |
7 | 用塑料膜封板，室溫（18-25.℃）孵育30min |
8 | 重復(fù)步驟5 |
9 | 加入100ul即用型TMB底物溶液至各孔 |
10 | 室溫避光孵育1--20min，用鋁箔包住反應(yīng)板， 避免光照。 |
11 | 加入100ul H2SO4到各孔，終止反應(yīng)。 |
在分光光度計中讀取結(jié)果。450nm作為初始波長，630nm作為參考波長。 | |
結(jié)果分析
以吸光度為Y軸，相應(yīng)的IL-23標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸做標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品的IL-23含量可根據(jù)其O.D.值由標(biāo)準(zhǔn)曲線推斷出來。
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