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更新時間:2024-10-11
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用途:人IL-6 ELISA試劑盒用于體外定量檢測人血清,血漿,緩沖液或細胞培養(yǎng)液中的白介素6。此試劑盒只用于科研,不能用于診斷。
檢測原理:
IL-6試劑盒應用的是夾心法固相酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)。IL-6特異單克隆抗體被包被于微孔板上,已知IL-6濃度的標準品和未知濃度的樣品可在此反應孔中進行檢測。先將IL-6抗原和生物素標記IL-6特異單克隆抗體同時孵育。洗滌后加入親和素過氧化物酶,孵育后洗去未結合的酶。其后加入底物,產生顏色反應,顏色的深淺與樣品中IL-6的濃度成一定的比例關系。
試劑盒組成及配制:
試劑(2-8℃保存) | 1x96孔的配置 產品編號:#950.030.096 |
配制 |
96T微孔板 | 1 | 即用型(已包被) |
塑料板蓋 | 2 | |
標準品:200pg/ml | 2瓶 | 按瓶上的說明稀釋(見試劑制備) |
標準品稀釋緩沖液(Buffer) | 1瓶(25ml) | 10x濃度,用純水稀釋。(見試劑制備) |
標準品稀釋液液(Human serum) | 1瓶(7ml) | 即用型 |
對照 | 2 | 按瓶上的說明稀釋(見試劑制備) |
生物素標記IL-6抗體 | 1瓶(0.4ml) | 用生物素標記抗體稀釋液稀釋(見試劑制備) |
生物素標記抗體稀釋液 | 1瓶(7ml) | 即用型 |
親和素-HRP | 2瓶(5ul) | 0.5ml HRP稀釋液預稀釋(見試劑制備,) |
HRP稀釋液 | 1瓶(23ml) | 即用型 |
洗滌緩沖液 | 1瓶(10ml) | 200x,蒸餾水稀釋(見試劑制備) |
TMB | 1瓶(11ml) | 即用型 |
H2SO4終止液 | 1瓶(11ml) | 即用型 |
自備材料:
蒸餾水;加樣器:10ul, 50ul, 100ul, 200ul, 1000ul; 漩渦振蕩器和磁力攪拌器
保存條件:
試劑盒保存于2-8度,
樣品收集,處理和保存:
1. 細胞培養(yǎng)上清:1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
2. 血清——操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000xg離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
3. EDTA,檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000Xg離心30分鐘去除顆粒。
4. 如果樣品不直接使用,將其分為小部分(250-500ul)-70℃下保存,避免反復凍融。
如果可能,不要使用溶血和高脂血。如果血清中有大量的顆粒,檢測前先離心或過濾。
注意:不要在37℃或56℃加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍
檢測程序
使用前,將所有試劑充分混合,不要使液體產生泡沫。根據樣品數(shù)量加上空白,標準品決定所需的板條,每個樣品,標準品,空白和質控都應做雙份。
詳細步驟 | |
1 | 制備標準曲線 |
2 | 按實驗方案在對應孔加入100ul標準品和樣本,標準品,對照及空白(選擇合適的標準品稀釋液)所有孔均做復孔。 |
3 | 加入50ul稀釋后的生物素標記的IL-6抗體到各孔 |
4 | 用塑料膜封板,室溫(18-25℃)孵育1小時 |
5 | 去掉封板膜,按以下程序洗板: a. 吸出孔內液體。 b. 每孔加入300ul1X的洗滌緩沖液 c. 吸出孔內液體 d. 重復步驟b和c兩次 |
6 | 加入100ul親和素-HRP溶液到各孔 |
7 | 用封板膜,封板,室溫(18-25℃)孵育30min |
8 | 重復步驟5 |
9 | 加入100ul即用型TMB底物溶液至各孔 |
10 | 室溫避光孵育12-15min,用鋁箔包住反應板, 避免光照。 |
11 | 加入100ul H2SO4終止液到各孔,終止反應。 |
在分光光度計中讀取結果。450nm作為初始波長,620nm作為參考波長。 |
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